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谷氨酸生产的种子制备

作者:恒昌机械 时间:2019/9/9 11:46:08 浏览:64次

谷氨酸生产的种子制备

内谷氨酸发酵的种子扩大培养普遍采用二种子扩大培养,流程如下:斜面菌种种子二种子发酵罐菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸,并要求斜面菌种无杂菌和噬菌体污染。培养条件应有利于菌种繁殖。培养基多含有机氮,不含或少含糖。

谷氨酸斜面培养基组成为:葡萄糖0.1%,蛋白胨1.0%,牛肉膏1.0%,NaCl0.5%,琼脂2.0%~2.5%,ph 7.0~7.2(传代和保藏斜面不加葡萄糖)。7338、B9类菌种培养温度为30~32℃,T613类菌种培养温度为33~34C,培养18~24h。

每批斜面菌种培养完成后,观察菌种生长,颜色和边缘等特征是否正常,有无感染杂菌和噬菌体的征兆,质量有问题的菌种不用于生产,同时查明污染的原因。斜面菌种的培养是生产过程中的重要环节,操作必须严格认真,无菌室的环境和设施要达到无菌控制的要求,同时加强管理,经常打扫和灭菌,防止杂菌和噬菌体的污染。

生产中使用的斜面菌种不宜多次移接,般移接三代,以免菌种衰退。在生产中经常进行菌种的分离纯化,不断提供新的斜面菌株满足生产的需求。

种子培养的目的在于获得大量繁殖活力强的菌体。为达到此目的,培养基组成应以少含糖分,多含有机氮为主,培养条件有利于菌种快速地增殖。培养基组成为:葡萄糖2.0%,尿素0.5%,MgSO40.04%,K2hpO40.1%,玉米浆2.5%~3.5%,FesO40.0002%,MnSO40.0002%,ph7.0(菌种不同,培养基成分可以适当调整)。

培养条件为:1000mL三角瓶装入培养基200mL,100r-min-1,振荡培养12h,7338和B9类菌的培养温度为30~32℃,T613类菌为33~34℃。

种子质量要求为:种龄12h,ph6.4,无噬菌体污染,菌体生长均匀、粗壮、排列整齐,OD值净增0.5以上,残糖0.5%以下,无杂菌污染,革兰氏反应为阳性。

某些工厂为了防止感染杂菌和噬菌体,种子先做平板检验,确认无杂菌及噬菌体感染后接入二种有的工厂种子不用三角瓶摇瓶培养,而是培养大型斜面(茄子瓶斜面)作为种子使用。次制备批种子,贮存于冰箱中。这种做法的优点是利用固体培养物比液体培养物容易保存的优点,次制备批大型斜面,不用重复制备种子。

为了获得发酵所需要的足够数量的菌体,进行种子罐的二种子培养。二种子的培养基,因菌种不同而有较大差异。T613的菌种二扩大培养基组成为:葡萄糖3%,玉米浆2.5%,Kh2pO40.15%,MgSO40.04%,尿素0.4%,Mn2+0.0001%,Fe2+0.0001%。种子罐体积取决于发酵罐的体积和接种比例。

在实际生产中,应根据菌体生长情况,调整培养基组成。培养条件为:接种量0.8%~1.0%;培养温度为30~32℃(不同菌种温度不同);不同容量的种子罐通风量有所不同,如50L种子罐通气量1:0.5m3-(m3-min)-1,搅拌转速为340r-min-1,500L种子罐通风量为1:0.25m3(m3-min)-1,搅拌转速为230r-min-1。二种子质量要求为:种龄7~8h,无噬菌体和杂菌污染,ph7.2,OD值净增0.5,残糖消耗1%左右,菌种生长旺盛,排列整齐,革兰氏染色为阳性。


影响种子质量的因素共有六项:

①种子培养基要含有充足的氮源和维生素、少量的碳源,以利于菌体生长,如果糖分过多,有机酸使ph降低,菌种容易衰老;

②幼龄菌对温度变化敏感,应避免温度急剧变化;

③开始培养时ph不宜过高,培养结束时ph不宜过低;

④菌体生长的适溶解氧浓度并不是特别高;

⑤接种量低,菌体增长缓慢,延滞期长,培养时间长影响种子活力,接种量过大,操作中易引起污染,般接种量以1%左右为宜;

⑥培养时间不宜太长,般7~8h,对数期菌种接入发酵罐。



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